朋友去医院检查让做qpcr,那qpcr检测的是什么水平?qpcr的目的和检测时的注意事项?
实时荧光定量PCR技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。由于其精准度好、灵敏度高,在分子生物学研究与医学研究有较高的水平。
qPCR的目的是在PCR期间监测目标DNA分子(DNA或cDNA)的扩增,PCR产物的实时检测可以通过使用DNA结合染料和荧光PCR引物或探针两种方法来实现。DNA结合染料是一种非特异性的荧光染料,与任何双链DNA分子(dsDNA)相互作用。这些染料的化学性质可能很简单,但它们非常有效。DNA与染料结合所释放的荧光量与dsDNA的数量成正比,常用的DNA结合染料的例子是SYBR Green。
与DNA结合染料不同的是,荧光PCR引物和基于探针的化学反应可以根据荧光淬灭的原理对目标DNA序列进行特异性结合。在本质上,PCR引物或目标特异性寡核苷酸探针被标记报告基团,并被淬灭基团淬灭。一旦引物或探针与特定的目标序列结合,报告集团和淬灭集团被一个特定的化学机制分开(裂开或因距离分开),产生荧光。所释放的荧光量与样品中特定的目标DNA数量成正比。
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